簡要描述:轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)產(chǎn)品特點(diǎn):1、靈敏度高,抗污染能力強(qiáng),定量準(zhǔn)確,重復(fù)性好;2、樣本處理與PCR擴(kuò)增在同一個PCR反應(yīng)管中即可完成;3、無需加熱產(chǎn)品說明:1.高便捷性。 2.靈敏度高。 3.特異性強(qiáng)。 4.精密性好。 5.結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 6.嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)構(gòu)及組成:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液(PCR反應(yīng)液)、RNA
產(chǎn)品分類
Product Category詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | HXG740 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研使用 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)
通用名稱:轉(zhuǎn)基因大豆 MON87705 品系核酸檢測試劑盒 (熒光-PCR 法)
Name :Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】50T/盒
本試劑盒適用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的 MON87705 基因,用于篩查待檢測植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用國家標(biāo)準(zhǔn)的 MON87705 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分的檢測。
【試劑組成】
名 稱 | 規(guī) 格 |
酶液 | 50μL×1 管 |
MON87705 反應(yīng)液 | 500μL×2 管 |
MON87705 陽性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 |
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融,反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次。有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標(biāo)本采集】稱取 200g 樣品。【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃。
轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
固體樣本:用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀。
對于固體標(biāo)本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:
1) 每個樣品取 2 個平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預(yù)冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;
2) 加入 600μL 預(yù)熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min, 期間顛倒混勻 5 次;
3) 室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯酚:異戊醇溶液:異戊醇溶液各抽提一次;
4) 室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5),-20℃放置 2-3h;
5) 在 4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;
6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。
油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒,按說明操作。
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 | MON87705 反應(yīng)液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
1.1 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測通道
(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)選擇 NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。
1.2 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
結(jié)果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;
可疑:檢測通道 35<Ct 值≤38,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤ 38,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。
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